стр. 1
(общее количество: 2)

ОГЛАВЛЕНИЕ

След. стр. >>


В.Г. Лазурьевский, Л.А.Николаева










КАННАБИНОИДЫ
наркотические вещества конопли




Содержание
Предисловие 3
1. Наркотические средства 5
2. Конопля и гашиш 11
3. Специфические вещества конопли – каннабиноиды 14
4 Методы обнаружения гашиша и его фенольных компонентов. 27
4.1 Качественные реакции 27
4.2 Количественные и полуколичественные методы 29
5. Выделение индивидуальных каннабиноидов из гашиша. 34
5.1 Разделение на колонке 35
5.2 Газовая хроматография (ГЖХ) 35
5.3 Препаративная бумажная хроматография. 36
5.4 Метод противоточного распределения 37
5.5 Ионообменная хроматография 38
5.6 Получение каннабиноидов синтезом 39
6. Физиологические свойства гашиша и каннабиноидов. 39
7. Психохимия и фармакология. Успехи и перспективы. 47
Литература 52


Предисловие

Гашиш - смолиста зеленовато-бурая масса, которую получают из соцветий индийской конопли (Cannabis sativa v. Indica). издавна используется как наркотик вызывающий состояние своеобразного опьянения. Систематическое его употребление ведет к тяжелым физическим и психическим расстройствам организма ослаблению памяти и воли, резкому понижению работоспособности.
Наряду с другими наркотиками применение гашиша признано социально опасным и запрещено в СССР государственным законодательством. Нелегальное производство, торговля и использование гашиша карается у нас и в ряде других стран по статьям уголовного кодекса Однако это наркотическое средство распространено в странах Восточной Азии и в некоторых капиталистических государствах Запада Огромные прибыли от различных операции с наркотиками стимулируют злоупотребления, спекуляции, контрабанду и подпольную торговлю. Многие юристы отмечают прямую зависимость между употреблением наркотиков и числом преступления.
Борьба с распространением наркотиков вышла за пределы отдельных стран и превратилась в международную проблему социального и правового характера. Организация Объединенных Наций налаживает сотрудничество государств для предотвращения дальнейшего развития наркомании. Представителями многих стран принята Единая конвенция, предписывающая ограничить применение наркотиков только научными и медицинскими потребностями, учредить строгай контроль за их производством и продажей.
Ведется систематическая разъяснительная работа среди населения о вредности наркотиков для здоровья; в необходимых случаях требуется активное вмешательство судебных и контрольных органов охраны общественного порядка. Важным условием эффективности борьбы с наркоманией является глубокое и всестороннее изучение возникшей проблемы.
Конопля и гашиш — объект многочисленных исследований ботаников, химиков, фармакологов, врачей-психиатров, социологов, юристов и криминалистов.
Нами обобщены литературные сведения по гашишу, главным образом о химической природе и свойствах физиологически активных его компонентов, приведены некоторые данные собственных наблюдений и экспериментов.
Особое внимание уделено вопросам выделения индивидуальных каннабиноидов и их идентификации. Описываются методы препаративного получения тетрагидроканнабинола – основного носителя психотропной активности гашиша. Теперь это вещество можно считать для использования в научной психиатрии и при изучении некоторых задач физиологии высшей нервной деятельности. Чистые каннабиноиды используются в качестве модельных соединений и «свидетелей» в хроматографии.
В книге пропагандируется необходимость активной борьбы с распространением наркомании, которую можно успешно вести только на основе последних представлений о химической природе наркотиков, их физиологической и психотропной активности.





Принятые сокращения
ВОЗ
Всемирная организация здравоохранения
ГЖХ
газожидкостная хроматография
ИК
инфракрасный спектр
КБГ
каннабигерол
КБД
каннабидиол
КБДК
каннабидиоловая кислота
КБН
каннабинол
КБХ
каннабихромен
КБЦ
каннбициклон
ЛСД
диэтиламид лизергиновой кислоты
ПМР
спектр протономагнитного резонанса
ТГК
тетрагидроканнабинол
ТГКВ
тетрагидроканнабидиварол
ТГКК
тетрагидроканнабиоловая кислота
ТСХ
тонкослойная хроматография
УФ
ультрафиолетовый спектр
ЦНС
центральная нервная система


1. Наркотические средства

Наркомания не представляет собой нового явления. С незапамятных времен в поисках самозабвения и призрачного счастья люди употребляли разного рода опьяняющие в одурманивающие средства. Во время ритуальных церемоний не только неистовые танцы, бравурная музыка, но и применение некоторых растительных веществ приводили человека в состояние экстаза. Древнегреческий историк Геродот, описывая быт скифского племени, отмечал: «Люди садились вокруг костра, бросали в него какие-то плоды и опьянялись дымом этих плодов». Возможно, это одно из первых упоминаний об использовании наркотиков.
Благодаря специфическому действию на нервную систему, наркотики вызывают притупление боли, иллюзии и галлюцинации, приводят человека в состояние блаженства, легкости и довольства. И хотя приятные впечатления быстро сменяются общей слабостью, упадком сил и забытьём, появляется труднопреодолимое желание снова испытать действие наркотиков. При частом их употреблении у человека возникает физиологическая потребность в них, причем для получения желаемого эффекта требуются постоянно возрастающие дозы [1]. В литературе описываются случаи, когда закоренелые наркоманы вводили себе в вену за один прием смертельные (для здоровых люден) дозы морфина [2].
Длительное злоупотребление наркотиками ведет к постепенному нарушению нормальной жизнедеятельности человека, вызывает склонность к заболеваниям желудочно-кишечного тракта, органов кровообращения, существенно нарушает половую функцию, а главное, возникают нервно-психические расстройства [3]. Повышенная раздражительность, лживость, потеря чувства долга, ослабление памяти, безволие и безразличие — характерные особенности наркоманов. Последняя черта (безразличие) относится только к утрате интереса к окружающим жизненным явлениям, но в обеспечении себя наркотиками наркоманы проявляют невероятную настойчивость и упорство. В поисках наркотиков такие обреченные люди готовы на любые жертвы, ограничения и даже преступления [4].
Среди природных наркотических средств наибольшее распространение на Ближнем и Дальнем Востоке (Китай, Индия, Афганистан, Турция, ОАР и др.) имеет опий и гашиш, а в странах Латинской Америки — листья кока.
Опий, получаемый из недозрелых коробочек снотворного мака, содержит сложную смесь азотсодержащих соединений (алкалоидов). Он применяется также как исходное сырье для выделения морфина, кодеина и других ценных лекарственных средств. Гашиш получают из цветущей конопли.
В наши дни плантации мака и индийской конопли возделывают главным образом в странах Азии и Африки. Характерно, что опий и гашиш на пути от основного производителя к потребителю при незаконной торговле проходят через руки многочисленных маклеров, оптовых и розничных торговцев и контрабандистов, которые получают при этом баснословные барыши. В нелегальных притонах и полукустарных производствах опий перерабатывают в морфин и героин, гашиш расфасовывают мелкими партиями или готовят из него спиртовые экстракты
Туземцы Боливии и Перу издавна употребляют листья кустарника кока, которые якобы утоляют голод, поддерживают физические силы и сохраняют хорошее расположение духа. До последнего времени главными производителями листьев кока являлись жители Латинской Америки. Со второй половины прошлого столетия из листьев кока стали выделять главное действующее начало — белый кристаллический порошок — кокаин. Первоначально кокаин широко использовался в глазной, зубоврачебной и хирургической практике в качестве местного обезболивающего средства, но затем он был частично вытеснен более дешевыми и не менее эффективными синтетическими анестетиками (новокаином и др.), которые лишены ядовитых и наркотических свойств кокаина. Тем не менее кокаин еще не утратил своего значении в медицинской практике.
Диэтиламид лизергиновой кислоты (ЛСД) представляет собой полусинтетический наркотик, получаемый из алкалоидов спорыньи. Спорынья (маточные рожки) — паразитный грибок, развивающийся в злаковых культурах. Употребление муки и зерна, засоренного рожками спорыньи, вызывает отравление людей в животных. В средние века, когда причина заболевания и меры борьбы с ним не были известны, оно причиняло людям большой ущерб и подчас носило характер массового бедствия (эрготизм).
Маточные рожки были предметом длительного и всестороннего изучения и препараты из них давно уже нашли применение в акушерской и гинекологической практике. Из спорыньи выделяют алкалоиды, являющиеся производными лизергиновой кислоты (эрготоксин, эрготамин и др.). Эта кислота легко может быть получена из смеси алкалоидов при щелочном гидролизе, в свободном состоянии или в виде амида. Для перехода к наркотику амид остается только проалкилировать.
Наркотические свойства ЛСД впервые были обнаружены швейцарским химиком Гофманом в 1943г. В настоящее время производство ЛСД за рубежом стало предметом крупного нелегального бизнеса. Грибок спорыньи прежде уничтожали, теперь его преднамеренно культивируют.
Это вещество, относящееся к производным индола, называют «королем» современных наркотиков, так как оно даже в небольших дозах вызывает красочные галлюцинации. ЛСД настолько будто бы обостряет чувство восприимчивости, что «музыка становится зримой, а живопись осязаемой». Такая реклама в США сделала ЛСД «модным» препаратом среди наркоманов. Однако коварные его свойства испытали уже многие тысячи пострадавших.
Американские газеты сообщают о частых случаях самоубийства и убийств, совершаемых наркоманами. Психиатрические больницы заполнены потребителями ЛСД, которым не удалось избавиться от галлюцинаций даже после того, как они перестали его принимать.
В капиталистических странах распространен также героин (ацетилморфин) и ряд синтетических наркотических средств: диалкилтриптамин (ДТМ), мескалин, псилоцибин и другие.
В отличие от опия и гашиша перечисленные наркотики являются индивидуальными кристаллическими соединениями, могут быть точно дозированы, но для их получения требуется сравнительно высокая квалификация химиков и хотя бы несложное лабораторное оснащение.
В наше время учащаются случаи применения и более безобидных наркотиков. Отмечаются пристрастия к снотворным препаратам, всевозможным успокаивающим средствам и стимуляторам. Известны случаи кофеиноманин у лиц, злоупотребляющих крепким кофе и чаем. Подчас и они приводят к тяжелым психическим расстройствам.
В странах Запада спортсмены пользуются различными возбуждающими средствами (допингами); это несовместимо со спортивной этикой и проводится скрытно. Многие допинги являются типичными наркотиками и таят в себе серьезную опасность для здоровья. Зафиксировано немало случаев, когда слишком большие дозы амфетаминов и других препаратов оказывались причиной трудно излечимых заболеваний.
Курение табака и непомерное употребление спиртных напитков относятся к разновидностям наркомании. Табак и алкоголь вредны для здоровья и снижают среднюю продолжительность жизни человека, но они получили на земном шаре повсеместное распространение.
Наркотические средства принадлежат к самым различным классам органических соединении; между ними подчас трудно найти что-либо общее в строении молекул. Это видно из приведенных структурных формул наиболее распространенных наркотиков. Объединяют их сходные физиологические свойства: они в больших дозах яды, а в умеренных — своеобразно действуют на центральную нервную систему, вызывая нарушения психики и заметные изменения в восприятии окружающей действительности.















Формулы важнейших природных, полусинтетических и синтетических наркотических веществ

Героин
(ацетилморфин)

Кокаин (из листьев коки)

Тетрагидроканнабинол
(из конопли)

Диэтиламид лизергиновой кислоты

Диметилтриптамин (ДМТ)

Мескалин

Псилоцин

Дитран
Эти вещества, получившие название психотропных, привлекают особое внимание биохимиков, фармакологов и врачей-психиатров [5, 6] Изучение физиологических свойств наркотиков позволяет раскрыть отдельные процессы высшей нервной деятельности, моделировать патологические психические состояния и лечить некоторые заболевания. Выяснение механизмов и сущности таких процессов на молекулярном уровне является одной из актуальных задач современной биологической и медицинской науки. В этой связи возрастает значение всестороннего химического и фармакологического изучения различных психотропных веществ.
О возрастающем интересе к психотропным веществам свидетельствует поток разнохарактерной информации в специальных и общедоступных научных журналах и монографиях.
Всесоюзное химическое общество им. Д. И. Менделеева в 1964 и 1970 гг. посвятило отдельные номера своего журнала вопросам современной биохимии и химиотерапии нервных и психических заболеваний.
Задача новых ответвлений науки (психохимии, психофармакологии) — найти причинную взаимосвязь между чувствами, эмоциями и химическими реакциями, протекающими в соответствующих клетках мозга (нейронах). Распознание этой связи открывает перспективу не только проникнуть в интимную сферу деятельности мозга, наиболее сложного органа животных и человека, но и в какой-то мере управлять ею, вносить извне коррективы с помощью физических и медикаментозных воздействий.
Людей привлекают табак, алкоголь и наркотики не только потому, что они плохо воспитаны или испытывают трудности жизни, но и своеобразные эмоции, чувство удовольствия и радости. Механизм и биохимия такой «тяги» еще не выяснены окончательно.
У животных также наблюдаются пристрастия типа наркомании. Всем известно, как меняется поведение кошек от одного только запаха настойки валерьяны. Муравьи, опьяненные выделениями некоторых насекомых, перестают выполнять веками сложившиеся традиционные рабочие обязанности.
Все то, что происходит в клетках мозга при приятных ощущениях или, наоборот, при страданиях имеет материальную основу, то есть сопровождается сложными микрофизико-химическими реакциями. Отдельные вопросы подобных механизмов изучены экспериментально, однако еще многое не выяснено Большой вклад вносят химики и фармакологи, открывая новые препараты, воздействующие на ЦНС
В арсенале многочисленных психотропных средств определенное место занимают и вещества конопли — каннабиноиды
Несмотря на широкое распространение и доступность конопли и гашиша, использование каннабиноидов в научной и практический психиатрии и фармакология до недавнего времени было ограниченным по сравнению с другими наркотиками. Это можно объяснить трудностью получения физиологически активных компонентов гашиша в индивидуальном состоянии ( новые методы препаративного их выделения описаны в V главе)
Президиум Верховного Совета СССР ратифицировал Единую Международную Конвенцию принятую по предложению специальной комиссии по наркотическим средствам Экономическим и Социальным Советом Организации Объединенных Наций. Конвенция охватывает многие стороны контроля над наркотическими средствами от их изготовления до распространения и употребления. В преамбуле Конвенции записано, что в ряде стран отмечается постоянный рост числа наркоманов и что необходимо установить за ними строжайший контроль[7].
В основе массового распространения наркомании в капиталистических странах лежат социальные причины. С одной стороны, это характерно для эпохи империализма общее обнищание трудящихся, изнуряющий труд, неуверенность в завтрашнем дне. С другой стороны, наркомания проникает и в среду богатых людей, особенно их детей, которым без труда и забот предоставляются все жизненные блага[8]. Пресыщенность жизнью, скука стремление уйти от реальной действительности к новым, изысканным развлечениям — причины увлечения наркотиками. Именно молодежь в поисках выхода из идейного тупика легко поддается иллюзии острых ощущений. Неслучайно в США, самой развитой капиталистической стране, наркомания наиболее распространена.
Общее количество людей, страдающих этим пристрастием, не может быть точно определено. Регистрируются лишь наркоманы, которые сами или по принуждению обращаются за медицинской помощью, а также случаи, выявленные в результате деятельности контрольных и следственных органов. Приблизительные данные, имеющиеся в распоряжении ООН, показывают, что в среднем в странах мира наркоманы составляют более 0,1% численности населения. В США в 1956 г. насчитывалось около 60 тыс. наркоманов [9].
Попытки запретить или хотя бы ограничить торговлю и потребление наркотиков в рамках одной страны подчас оказываются тщетными. В странах капитализма широко распространена нелегальная торговля наркотиками. Поток контрабандного опия и гашиша движется с Востока в Европу и Америку. Для переброски используются все виды транспорта. По данным Комиссии ООН, число случаев конфискации наркотиков, перевозимых самолетами, особенно быстро возрастает. Статистические сведения [10] показывают, что в 1962г. Было изъято более 260 т гашиша, а зарегистрированные случаи его употребления исчисляются многими миллионами.
Большое количество конфискуемых наркотиков указывает на улучшение работы международных и государственных контрольных органов, однако это свидетельствует и об увеличении наркомании.
В СССР ликвидирована социальная почва для возникновения наркомании. Большую роль играют строгие меры контроля над распределением наркотиков, производимых на государственных предприятиях для медицинских целей. Нарушение правил хранения, учета, транспортировки, равно как и содержание притонов для потребления наркотических средств, наказуется в уголовном порядке лишением свободы на различные сроки (Уголовный кодекс РСФСР, ст. 224—226). Тщательная охрана границ от контрабандного ввоза наркотиков создает у нас благоприятные условия для борьбы с наркоманией.
При Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) создан комитет экспертов по лекарственным средствам. Одной из функций этого комитета является составление перечня веществ, которые должны находиться под международным контролем. Эксперты рассматривают планы и результаты научных исследований, выносят рекомендации по субсидированию этих работ из фонда ВОЗ.
Комитет экспертов обсуждает и некоторые вопросы, касающиеся лечения наркоманов. Рекомендовано прибегать к их принудительной изоляции и передаче под контроль медицинских учреждений, которые должны обеспечить наблюдение за больными до полного излечения. Трудность осуществления благородных замыслов ООН усугубляется тем, что торговля наркотическими средствами приносит огромные прибыли.
По отдельным юридическим и организационным вопросам, связанным с осуществлением конвенции в разных странах, не достигнуто единомыслия. Высказываются даже предложения о легализации употребления наркотиков и, в частности, гашиша [11]. В оправдание подобных суждений приводится тот факт, что в странах, где потребление гашиша практикуется многие сотни лет, в прошлом оно никогда не расценивалось как социальное бедствие.
Некоторые ученые утверждают, что гашиш якобы не является истинным наркотиком, а лишь возбуждает нервную систему; прекращение его употребления не ведет к заметным физическим и психическим нарушениям. Но такие взгляды не разделяются большинством специалистов.

2. Конопля и гашиш
Конопля (Cannabis sativa)—травянистое, однолетнее, раздельнополое, ветроопыляемое растение из семейства тутовых. Мужские особи, по сравнению с женскими, тонкостебельные, дают высокий выход волокна. Женские особи более разветвлены. Стебель конопли обычно вырастает до 2 м. Отдельные растения достигают высоты 4 м.
Индийская конопля (Cannabis sativa v. indica) —продуцирующая гашиш, произрастает в Африке, Иране, Турции, Сирии, Индии, Китае, в Южной Америке и в других странах и континентах.
К этому же виду относится и другая разновидность конопли— посевная или обыкновенная (Cannabis sativa поп indica), которая возделывается в умеренном поясе как волокнистое и масличное растение. Из волокна конопли делают веревку, упаковочный шпагат, мешковину, парусину, обивочную и драпировочную ткань; из тонковолокнистых её сортов вырабатывают холст. В семенах содержится масло (до 35%), которое изредка применяется как пищевое в рыбоконсервном и кондитерском производстве, а чаще для изготовления мыла и олифы. Конопляный жмых считается хорошим кормом для скота. Культура посевной конопли широко распространена в Советском Союзе [12]. Среди других прядильных растении конопля занимает третье место после хлопчатника и льна.
Несмотря на почти полное морфологическое родство с индийской, конопля обыкновенная дает меньше смолистых выделений и, как правило, не применяется для получения гашиша. Вероятно, здесь сказываются различные климатические условия произрастания конопли. Однако при сравнении экстрактов из растений субтропических стран (С. indica) с экстрактами из обыкновенной конопли, выращенной в ФРГ (С. sativa), было установлено, что по составу они сходны и различаются только количественным содержанием отдельных компонентов [10].
Дли получения наркотика обычно используются верхушечные листья и соцветия. Собранная с них смолка, слипающаяся в зеленовато-коричневую массу, и представляет собой гашиш. По данным комиссии ВОЗ, это самый распространенный наркотик [13], что, очевидно, объясняется доступностью конопли, почти повсеместно произрастающей на земном шаре.
Химическое, токсикологическое и фармакологическое изучение конопли и получаемого из нее гашиша затруднено прежде всего изменчивостью его состава. В зависимости от сорта и местопроизрастания растения, а также времени сбора выход, состав и свойства гашиша значительно варьируют. Содержание активных компонентов также заметно меняется от условий и сроков хранения. Гашиш как продукт нелегальной торговли подчас встречается с дешевыми наполнителями [14]. Все это намного осложняет работу исследователей.
По меньшей мере столетние усилия ученых были тщетными в изучении химической природы гашиша, однако интерес к этому вопросу постоянно возрастал.
В 1965г. Вышла в свет полная библиография по гашишу, где приводятся 1860 название различных изданий [14]. В настоящее время это число, по-видимому, превысило две тысячи.
Смолка конопли известна под разными названиями. Термин «гашиш» распространен в Европе и Ближнем Востоке. В Средней Азии ее именуют «анаша», в Индии- «харас», в Северной Америке—-«марихуана», в Бразилии — «маконхэ». Известны также синонимы: гаджа, план, дагга, банг и др.
Гашиш как наркотик используется различными способами: с пищей или в виде подслащенного густого спиртового экстракта сдобренного пряностями, но чаще всего его добавляют к табаку и курят как сигареты или с помощью специального приспособления, называемого «кальяном» или «чилимом», где смесь табачного и гашишного дыма пропускается через воду, а затем затягивается в легкие.
В некоторых странах распространены специальные папиросы, содержащие табак в смеси с гашишем.
Для общей характеристики приводим результаты выполненного нами анализа одного случайного образца гашиша (в%):

Влажность
8,5
Крахмал
6,2
Зольность
24,8
Целлюлоза
23,9
Сырой протеин
9,4
Лигнин
7,8
Сахара
0,9


Вещества, растворимые в метаноле (этаноле)
20,5
Подобные групповые анализы не позволяют сделать какое-либо важное заключение о природе гашиша. Из приведенных показателей представляет интерес зольность, в данном случае повышенная в сравнении с другими растительными продуктами. Это объясняется наличием каких-то минеральных примесей (песка, глины). Однако легко определяемая зольность может быть доказательством идентичности (или различия) образцов гашиша.
Второй важный показатель: вещества, растворимые в органическом растворителе. В метанол (или этанол) переходят наряду с другими органическими соединениями все каннабиноиды, а их содержание связано с эффективностью наркотического действия. Определяя спирторастворимые фракции в разных образцах, можно ориентировочно оценить «достоинство» гашиша как наркотика.
В качестве растворителей могут быть использованы и другие органические соединения. Выбирать их следует на основании наших данных, полученных при анализе того же образца гашиша.
5 г сухого гашиша, предварительно растертого с песком для разрушения клеток, извлекались растворителями последовательно, в порядке возрастания их полярности, в аппарате Сокслета. Экстракты высушивались и взвешивались.
Растворитель
Выход, %
Ориентировочное содержание фенольных соединений ( по качественным пробам)
Петролейный эфир
10,4
+++
Эфир
4,5
++
Бензол
3,0
+
Ацетон
2,1
Следы
Метанол
1,1
-
Всего
21,1

Суммарный выход экстрактивных веществ равен выходу их при использовании в качестве растворителя только метанола (см выше).
Фракция «сырой протеин» не обладает какой-либо специфичностью, то есть не отличается от обычного растительного белка, что было установлено нами по аминокислотному составу.
Отдельными пробами в анализированном образце гашиша доказано отсутствие сапонинов, алкалоидов и флаваноидов. Качественная проба на кумарины положительная.
По содержанию и соотношению каннабиноидов образцы гашиша различного происхождении заметно отличаются. Показана определенней зависимость состава фенольных компонентов от географических условий произрастания конопли.
Каннабиноиды обнаружены не только в цветущих метелках, но и в других частях растения, однако содержание их в листьях и стеблях более низкое, чем в гашише. (Фактический материал, относящийся к этому вопросу, приведен в IV главе.)
В литературе некоторое время дискутировался вопрос о наркотической ценности гашиша в зависимости от сортности и места произрастания конопли.
Известно, что конопля, произрастающая в различных районах Индии, продуцирует гашиш неодинакового качества. Замечено, что важным условием для высокоактивного гашиша являются определенная высота над уровнем моря, северные или южные склоны.
Очевидно, имеет значение и интенсивность солнечной радиации, влажность воздуха и особенности почвы. Так, микроклимат окрестностей Мюнхена оказывается благоприятным для конопли, дающей более активный гашиш, чем в других местах ФРГ.

3. Специфические вещества конопли – каннабиноиды
Своеобразное действие гашиша на организм животных и человека издавна интересовало ботаников, химиков фармакологов, врачей. Прежде всего необходимо было выявить химическую природу веществ, являющихся носителями наркотических свойств, а также пути их образования в растении, определить их содержание в зависимости от почвенно-климатических условий, разработать методы обнаружения и другие вопросы. В ранее опубликованных статьях было немало ошибочных данных и толкований отдельных наблюдений, что частично объясняется лабильностью физиологически активных соединений конопли.
Реальные результаты в химии гашиша были достигнуты лишь в 30-е годы нашего столетия; описаны способы выделения трех индивидуальных соединений (каннабинол, каннабидиол и тетрагидроканнабинол) и впервые приведены их правильные суммарные формулы.
Природа этих веществ была установлена в большой серии работ таких известных химиков, как Адаме (США) и Тодд (Англия). Они же осуществили первые синтезы каннабиноидов [15, 16. 17].
За последнее десятилетие в экстрактах гашиша было обнаружено еще несколько индивидуальных соединений. Все эти соединения оказались производными дифенила, содержащими в одном из циклов два фенольных гидроксила и радикал C5H11 (амилрезорцин). Другой цикл в пара-положении алкилирован метильным и изопропенильным радикалами. В некоторых веществах этот цикл частично гидрирован, а один из фенольных гидроксилов с изопропенилом образует третий окисный цикл. В этом случае вещества могут рассматриваться как производные дибензопирана. Наконец, в конопле были обнаружены также фенолокислоты и соединения, в которых циклогексановое кольцо раскрыто.
В исследованиях 30-х и 40-х годов разделение смеси фенольных соединений проводилось разгонкой в вакууме. Выход конечных продуктов был крайне низким и они не были свободны от примесей; при термическом воздействии возможны изомеризация, декарбоксилирование и другие реакции, приводящие к образованию вторичных продуктов.
Даже очищенная многократной перегонкой в вакууме сумма каннабиноидов — это красно-бурое масло, темнеющее при хранении. Ацетилирование частично стабилизирует его и облегчает процесс разделения. В работах ученых за последние десять лет было показано, что фенольные соединения конопли фактически представляют собой трудно разделяемую смесь структурных, оптических и геометрических изомеров. Расшифровать эти тонкие детали строения оказалось возможным лишь при использовании новейших физических методов и хроматографии.
Успехи в этой заключительной стадии исследования были достигнуты главным образом в Химическом институте университета в Бонне (ФРГ) под руководством Кортэ [20] и в Институте Вейзмаша под руководством Гаопи и Мехулэма (Израиль). Последние опубликовали наиболее полный обзор по химии гашиша[18].
Нами приведены формулы 9-фенольных соединений, выделенных из конопли, строение доказано с полной достоверностью, а также их важнейшие константы и сокращенные обозначения, которыми в дальнейшем мы будем пользоваться.
Среди фенольных соединений конопли описай также каннабициклол (КБЦ) (С21Н30О2) с т. пл. 152-1530С, строение которого показано ниже, но оно не сразу было строго установлено [18]. В 1971 г. в спиртовом экстракте листьев и цветочных головок конопли обнаружен «необычный» пропильный гомолог ТГК (C19H26О2), названный тетрагидроканнабидиваролом (ТГКВ) [19].

Как видно из приведенных формул, все каннабиноиды имеют родственное строение и с полным основанием могут быть объединены в одну группу природных фенолов.


Формула
Радикал
R=H
R= СООН

Каннабинол
(КБН),
С21Н26О2,
Тпл=75-760С
Каннабиноловая кислота (КБНК), С22Н26О4.

Каннабидиол
(КЕД)
С21Н30О2
Тпл=.66-670С
[?]D-123;-174
Каннабидиоловая кислота
(КВДК)
С22Н30О4

Тетрагидроканнабинол
(ТГК)
С21Н30О2
Масло [?]D-120;-263
Тетрагидроканнабиоловая кислота
(ТГКК)
С22И30°4
[?]D -206,8°

Каннабигерол
(Ш)
С21Н32О2
Тпл.=51-530С
Каннабигероловая кислота
(КБГК)
С22Н32О4

Каннабихромен
(КБХ)
С21Н30О2
Тпл.=144-1460С

Следует отметить, что у многих авторов, публикующих химические работы по гашишу, до последнего времени не было единообразия в терминологии. В работах Адамса применялась нумерация, установленная для дибензопирана, Кортэ с сотрудниками обозначали те же вещества, как принято для производных дифенила. Мы будем пользоваться наиболее удачной номенклатурой, предложенной Гаони и Мехулэмом, в которой природные каннабиноиды и их синтетические аналоги рассматриваются как фенилированные монотерпены. Это согласуется с требованиями современной рациональной номенклатуры.
В количественном содержании каннабиноидов в конопле нет постоянства. Варьирует также и соотношение между отдельными веществами в зависимости от сорта и места произрастания растения, сроков и способов сбора гашиша, продолжительности и условий хранения.
Однако, как правило, в смеси преобладают три вещества — КБН, КБД и ТГК и некоторые их кислотные производные. Остальные каннабиноиды содержатся в минорных и следовых количествах.
Из всех фенольных компонентов гашиша только КБН отличается химической устойчивостью и сравнительно легко выделяется в кристаллическом состоянии. Это объясняется полной его ароматичностью и отсутствием изомеров. В случаях, где циклогексановое кольцо частично дегидрировано, вещества могут быть в виде структурных, геометрических и пространственных изомеров. Смеси их представляют собой вязкие масла, трудно поддающиеся разделению на индивидуальные соединения.
Не просто установить и место локализации двойной связи в цикле из-за возможной ее миграции.
Строение КБН безупречно доказано на основании аналитических данных и встречного синтеза, схема которого приведена ниже[15]. Дигидрооливетол, полученный при каталитическом восстановлении оливетола, конденсировался с 2-бром-4метилбензойной кислотой в присутствии алкоголята натрия и ацетата меди. Образовавшийся лактон дегидрировался серой и обрабатывался иодидом метилмагния.
Это вещество в дальнейшем неоднократно использовалось для доказательства строения углеродного скелета изомеров ТГК, которые при дегидрировании превращались в легко идентифицируемый КБН.
Формула КБД выводится из дачных анализа, наличия двух фенольных гидроксилов (получение диметиловых эфиров), двух легко гидрируемых кратных связей, на основании образования муравьиной кислоты при окислении, свидетельствующей о том, что одна из кратных связей находится на конце боковой цепи.
Переход КБД в ТГК при нагревании с кислыми катализаторами, сопровождающийся уменьшением числа двойных связей и фенольных гидроксилов, свидетельствует о происходящей циклизации в производное бензопирана.
Положение двойной связи в циклогексановом кольце КБД было установлено Мехулэмом с помощью спектров ПМР [18], сопоставляемых со спектрами тетрагидроканнабидиола и моноэпоксида. В первом случае химический сдвиг протона при С3 составляет 3,0 м. д., во втором — 3,14 м. д. Это может быть объяснено только тем, что двойная связь находится при ?1(2).


Окисление тетрагидроканнабидиола (ТГКБД) перманганатом калия в ацетоне дало ментанкарбоновую кислоту, анилид которой оказался идентичным с анилидом вещества, полученного из транс-ментанхлорида по реакции Гриньяра с углекислым газом.
Мягкие условия окисления не должны изменять конфигурацию у С3, поэтому следует принять и для КБД транс-размещение изопропенильной группы по отношению к остатку оливетола. Абсолютная конфигурация ментанкарбоновой кислоты, а, следовательно, и всех природных каннабиноидов, установлена сопоставлением с глицериновым альдегидом и оказалась R-конфигурацией.
Строение КБД было неоднократно подтверждено синтезами, причем получены вещества, полностью совпадающие по свойствам с КБД из гашиша, а также его изомерами с двойной связью в положении ?3(4). Синтез диметилового эфира КБД, близкого к природному, приведен на стр. 24 (схема 1).
Структура ТГК вытекает из взаимосвязи его с КБН и КБД (стр. 18-19). Описаны также многовариантные синтезы структурных, геометрических и пространственных изомеров. Из всех известных каннабиноидов только изомеры ТГК отличаются высокой психотомиметической активностью; остальные фактически не являются наркотиками, хотя рассматриваются как биогенетические предшественники или как потенциальные их источники. Поэтому изучению строения изомеров ТГК уделялось особенно большое внимание.

Вместе с тем возникли трудности, обусловленные лабильностью ТГК и множеством изомеров. Преодоление этих трудностей является одним из крупных достижением современной органической химии.
Удельное вращение ТГК, полученного из разных образцов гашиша, колеблется в широких пределах; от [?]D – 1200 до 2100 для полусинтетического вещества из КБД достигает -2600. Синтезированный Тоддом ТГК имел [?]D - +81. Значения длин волн максимума поглощения в УФ-спектре ? макс. 208-227 нм [20] также непостоянны. Это можно объяснить различным соотношением изомеров ТГК в гашише разного происхождения.
Положение двойной связи в циклогексеновом кольце было постулировано еще Адамсом, который на основании химических превращений показал невозможность локализации двойной связи при ?4(5), ?5(6), ?2(3). Синтезированный им ?3(4) ТГК оптически недеятельный.
Альтернативное положение двойной связи при ?1(2) и ?1(6) в природном ТГК устанавливалось на основании спектров ПМР [21], где выявляется триплет 0,88 м.д. (алифатическая метильная группа), синглеты 1,08; 1,38, 1,65 м.д. (три метальные группы, при двойной связи или по соседству с кислородом), широкий дуплет 3,14 м.д. (протон при третичном углеродном атоме), широкий синглет 6,35 м.д. (олефиновый протон), дуплеть 6,00; 6,18 м.д. (два ароматических протона).
Сопоставляя химические сдвиги протонов при С2 и С3 в природном транс-ТГК и в синтезированном цис-ТГК, а также в КБД (где имеет место свободное вращение циклов), авторы делают вывод о преобладании транс-?1(2) ТГК в анализируемых образцах.
Казалось, что изомеры ТГК можно получить направленным синтезом, где положение двойной связи должно быть фиксировано в зависимости от строения исходных веществ (стр.24, схема III, IV). Однако в действительности всегда получались смеси, обогащенные тем или иным изомером. Методом газовой хроматографии Кортэ и Зипер обнаружили в гашише минимум три разных по свойствам ТГК [22]. При высокой температуре (около 200°) КБД превращается по меньшей мере в пять веществ, различающихся по хроматографической подвижности.
Превращение КБД и ТГК под действием кислых реагентов было подтверждено и нашими опытами. Более того, мы обнаружили и противоположный процесс, свидетельствующий о лабильности ТГК. Хроматографически однородный ТГК был оставлен на длительное хранение. По истечении 8 месяцев появились ранее отсутствовавшие примеси (пятна на хроматограмме) других фенольных соединеий, в том числе и КБД, то есть зафиксирована реакция размыкания окисного кольца
Гаони и Мехулэм [18] установили, что КБД при взаимодействии с кислыми реагентами частично циклизуются в ТГК. Если реакцию проводить в абсолютном спирте насыщенным хлористым водородом, то образуется преимущественно ?1(2) ТГК, если же в бензоле с пара-толуолсульфокислотой, то ?1(6) ТГК. Второй изомер считается более стабильным, при хранении его содержание возрастает за счет уменьшения первого. При проведении реакции с хлористым водородом в присутствии хлористого цинка в растворе хлористого метилена из оптически деятельного стабильного изомера (-)-транс ?1(6) ТГК образуется (-)-хлоргексагидроканнабинол, который при нагревании при нагревании с амилатом калия в бензоле вновь отщепляет хлористый водород и превращается в нестабильный ( )-транс-?1(2) ТГК.


Однако в процессе очистки и хранения проходит обратная изомеризация. поэтому дальнейшая работа по разделению изомеров была признана бессмысленной. В каждом образце ТГК можно лишь ориентировочно определить соотношение двух изомеров, с этой целью и в случае оптически деятельных соединений достаточно замерить удильное вращение, которое выше для (-)-?1(6) ТГК.
Пропильный гомолог ТГКВ [19] gри противоточном разделении экстракта конопли но .Крейгу получен в виде масла, дающего симметричный пик на ГЖХ, но время удерживания его было меньше, чем у ?1(2) ГГ'К. Цветные реакции оказались одинаковыми, ИK-спектры практически совпали, отсутствовало лишь поглощение при 2850 см-1. ПМР-спектры идентичны.
Масс-спсктрометрически показано, что молекулярный вес ТГКВ ранен 286, что на C2Н4-группу меньше молекулярного веса ТГК(314).
При сравнении масс-спектров ТГКВ и ГГ'К установлено, что относительные интенсивности пиков их молекулярных ионов являются величинами одного порядка (соответственно 0,68 и 0,81). В области высоких массовых чисел в обоих случаях наблюдается доброе 15 m/е (происходит потеря метильной группы), причем интенсивности пиков с m/е 271 соответственно тm/е 299 также соизмеримы. Учитывая идентичность масс-спектров, можно утверждать, что ТГ'КВ, так же как и ТГK, имеет ?1(2) двойную связь и циклогексановом кольце.
Строение каннабигерола (КВГ) было выяснено на основании следующих фактов: он имеет на 2 атома водорода больше, чем КВД, но такое же количество легко гидрируемых двойных связей. Следовательно, один из циклов должен быть раскрыт. КБГ оптически неактивен — асимметрические центры в нем отсутствуют. Вместе с тем УФ-спектр идентичен со спектром КБД. Это указывает на то, что двойные связи не сопряжены ни между собой, ни с ароматическим ядром. Структура КБГ подтверждена синтезом.
Каннабихромен (КБХ) заметно отличается от других каннабиноидов. УФ-спектр доказывает сопряжение с оливетоловым (ароматическим) кольцом. В спектре ПМР одна двойная связь имеет вторично-вторичный характер, другая находиться в ?-положении к атому кислорода, две другие – при двойной связи. Описан тетрагидроканнабихромен, полученный при гидрировании КБХ.
Среди компонентов гашиша обнаружены фенолокислоты. Строение КБДК установлено на основании перехода в КБД при декарбоксилировании и в КБНК при дегидрировании. Под влиянием кислых реагентов КБДК циклизуется в ТГКК. Эти превращении показаны на стр. 21. Положение кислотной группы доказано спектральным анализом. В ИК-спектре полоса 1098 см-1 соответствует ароматической кислотной группе. В спектре ПМР зафиксирован только один ароматический протон. Среди природных каннабиноидов не было обнаружено ни одной фенолокислоты, в которой бы отсутствовали водородные связи. Следовательно, фенольные и кислотные группы всегда находятся по отношению друг к другу в ортоположении.
Материалы о выделении и доказательстве строения кислот приведены в работе Мехулэма и Гаоип [18].
Ранее было высказано предположение, что КБД не входит в состав свежего гашиша, а образуется из КБДК ферментативным декарбоксилированием в процессе хранения. Однако КБД обнаружен в экстрактах, полученных непосредственно из цветущих метелок конопли, причем не только индийской, но и обыкновенной, особенно богатой КБДК [22, 23].
Нами этот же факт был установлен на образцах сорной конопли, произрастающей в Молдавии. Во всех случаях (в цветущих частях и листьях) при анализе на хроматограммах фиксировался КБД как непременная составная часть свежего экстракта.
Синтезы каннабиноидов описаны в большой серии работ: они проводились главным образом с целью доказательства или подтверждения их строения и только в отдельных случаях могут претендовать на препаративную значимость. Природные каннабиноиды все же следует считать пока более доступными, чем синтетические. Последние получаются далеко не всегда с хорошими выходами и также, нуждаются в очистке от неизбежных побочных продуктов. Эта операция не менее трудоемка, чем разделение природных соединений. Синтетически воспроизведены все каннабиноиды; более того, получены производные и не встречающиеся в конопле, например, ТГК с двойной связью между 3 и 4 углеродными атомами в циклогексеновом кольце. Мы приводим упрощенные схемы только 4 вариантов синтезов, выбранные из обширного литературного материала.
Схема I. Исходные вещества изопрен и диметоксиамилкоричная кислота [24]. Получен диметиловый эфир КБД с точно фиксированной двойной связью ?1(6).
Схема 11. Исходные вещества пулегон и оливетол [25]. Получена смесь структурных изомеров ?5(4) ТГК-
Схема III. Исходные вещества цитраль и оливетол [18]. Получена смесь цис- и транс-изомеров ТГК.
Схема IV. Исходные вещества (—)-вербенол к оливетол [18]. Получен идентичный с природным (—)-транс-?1(6) ТГК.
При синтезе КБД и ТГК обычно получаются рацемические соединения. Только в случае оптически деятельных исходных веществ сразу образуются определенные оптические антиподы. Так, из правовращающего вербенола (схема IV) синтезирован правый изомер ТГК.
На схеме показаны только исходные вещества и главные продукты реакции. В действительности при синтезах протекают весьма сложные процессы, о которых можно судить по обилию промежуточных и побочных веществ, обнаруживаемых с помощью различных методов хроматографии. Одна подобная реакция недавно была обстоятельно изучена [26]. Проводилась конденсация эквивалентных количеств оливетола с цитралем под каталитическим воздействием разных количеств пиридина.



В продуктах реакции был идентифицирован КБХ (15%), полученный из смеси многократной очисткой на флоризиле и молекулярной перегонкой в высоком вакууме в виде бесцветного масла. Три характерных максимума в УФ-спектре точно совпали с максимумами природного КБХ. Для синтезированного вещества снят спектр ПМР: два протона при двойной связи (5,44; 6,62 м. д.), два ароматических протона (6,10; 6,23 м. д.), характерный изопропилиденовый протон в виде триплета (5,08 м. д.), два олефиновых метила (1,58; 1,66 м. д.) и один метил в ?-положении к кислороду (1,38 м. д.). На основании этих данных не только показана полная идентичность синтезированного и природного КБХ, но убедительно подтверждена его структура.
Подобным же образом доказана и структура КБЦ. Среди сложной смеси продуктов этой реакции, кроме уже приведенных компонентов гашиша КБЦ и КБХ, авторы обнаружили свыше десяти новых каннабиноидов — бис-каниабихромен, изоканнабициклол и другие. Особый интерес представляют вещества, в которых оба фенольных гидроксила оказываются «зациклизованными» в форме пирановых производных (окисей). В другой работе [27], проводимой с теми же реагентами, но в иных условиях, получен каниабиноид, содержащий пероксидную группу и цис-сочленение циклогексанового кольца с пирановым.

Петржилка с сотрудниками [28] также провели интересную серию исследований по получению оптически деятельных каннабиноидов, в том числе и входящих в состав гашиша, что явилось окончательным доказательством их строения и стереохимии. Синтетическим путем были получены неизвестные ранее аналоги каннабиноидов, в которых варьирует состав боковой цепи в резорциновом ядре.
Примечательно, что в этом ряду каннабиноидов, полученных сначала синтезом, оказался н-пропильный аналог, обнаруженный недавно в конопле [19].
Описан также «азотный» аналог ?3(4) ТГК, не встречающийся в природе. Исходным соединением в этом синтезе был гидрохлорид 4-карбэтокси-N-метил-3-пиперидона, который конденсировался с оливетолом [29].

По своей психотомиметической активности азотный аналог оказался соизмеримым с ТГК.
В последние годы отмечается повышенный интерес к фенолокислотам из конопли. Многие авторы считают, что именно они являются первичными соединениями, и в процессе метаболизма в растении (или при курении) превращаются в собственно каннабиноиды.
Из работы Кимура и Окамото [30] следует, что главной coставной частью нативных каннабиноидов конопли, произрастающей в районе Саппоро в Японии, является ТГКК, которая легко декарбоксилируется уже при нагревании до 110°.
Ученые, изучавшие каннабиноиды, высказывали различны гипотезы относительно механизма их биосинтеза. Ниже приведена умозрительная схема образования каннабиноидов в растении, основанная на успехах в области биогенеза терпенов и химии фенолокислот конопли [18].

Все эти превращения, осуществляемые под воздействием ферментов, конечно, не являются случайными в обмене веществ конопли. Видимо, они каким-то образом включаются в качестве непременных элементов в механизм окислительно-восстановительных реакций и тем выполняют свою функцию. Конечным продуктом этих превращений является КБН, который отличается химической стабильностью и не принимает активного участия в биохимических процессах.


4 Методы обнаружения гашиша и его фенольных компонентов.
Для анализа гашиша могут быть использованы различные методы в зависимости от поставленных задач и обстоятельств. Следует иметь в виду, что гашиш является запрещенным наркотиком, поэтому никаких ГОСТов на него не имеется. Показателем «достоинства» гашиша в подпольных операциях служит субъективная физиологическая оценка, то есть эффективность одурманивающего действия.

4.1 Качественные реакции
В судебно-медицинской практике иногда возникают ситуации при которых необходимо ответить на вопрос, является ли образец гашишем. Заключение не должно основываться только на таких показателях, как внешний вид, цвет, запах, которых варьируют в широких пределах в зависимости от происхождения условий хранения гашиша и наличия в нем наполнителей.
Объективным критерием может служить рекомендуемая нами быстрая «проба на гашиш», основанная на реакции фенольных соединений (всегда присутствующих в конопле) с диазотированными ароматическими аминами.
Небольшое количество испытываемого вещества (около 0,2 г.) растирают шпателем на часовом стекле или в ступке с 1—2 мл спирта. Затем с помощью стеклянного капилляра, в который заправлен ватный тампончик, засасывают каплю спиртовом раствора и переносят ее на листок фильтровальной бумаги. После испарения спирта бумагу опрыскивают из пульверизатора диазотированным раствором п-нитроанилина или бензидина. Появление окрашенного в оранжевый цвет пятна подтверждает наличие гашиша в испытуемом материале. Для более четкого воспроизведения реакции в одно и то же место на бумаге наносят несколько капель экстракта, что повышает в пробе количество каннабиноидов и соответственно чувствительность реакции. Окрашенное пятно сохраняется долгое время, и отрезок бумаги может быть приобщен к делу в качестве вещественного доказательства.
Достоинством описанного метода является его доступность и быстрота. Анализ может быть выполнен в течение 1—2 мин.
В других случаях приходится доказывать принадлежности данного образца гашиша к той или иной партии (сорту). Здесь требуется более достоверная идентификация с одновременно качественной оценкой важнейших каннабиноидов: КБН, КБД и ТГК.
Нами предлагается простой вариант хроматографического определения гашиша: капля этанольного или метанольного экстракта, полученного как указано выше, наноситься на стартовую линию листа бумаги, который затем пропитывают диметилформамидом и помещается в геометрическую камеру. Одновременно на стартовую линию для сравнения наноситься капля экстракта, полученного от другой партии гашиша. Хроматографирование ведется по нисходящему или восходящему методу циклогексаном, насыщенным диметилформамидом. Необходимый для разделения раствор готовится так: смешиваются диметилформамид с циклогексаном в делительной воронке в соотношении 1:5. Верхний слон заливается в лодочку прибора, а нижний используется для импрегнирования бумаги и насыщения парами растворителя воздуха камеры, с этой целью его наливают на дно. На хроматографирование затрачивается 10-12 час. (удобно оставлять на ночь). После просушивания бумага опрыскивается свежеприготовленным раствором диазотированного п-нитроанилина. На линии старта остаются фенолокислоты. Проявляющиеся ниже линии старта три пятна окрашиваются в оранжево-желтый цвет, но различаются по оттенку и интенсивности. Сопоставляя хроматограммы испытуемого образца с контрольными, судят об их сходстве или различиях.
При необходимости дополнительного подтверждения идентичности двух образцов гашиша можно определить (см. II гл.) зольность и количество веществ, растворимых в органических растворителях в аппарате для автоматической экстракции. Для этой цели пригодны петроленный эфир, эфир, бензол и метанол. Совпадение результатов анализа в двух образцах доказывает их идентичность. Недостатком указанных методов является их длительность и необходимость иметь значительное количество вещества для анализа (несколько граммов).
Кортэ и Зипер [31] описали метод определения компонентов гашиша с использованием тонкослойной хроматографии (ТСХ) на кизельгеле Мерка. Подвижная фаза — циклогексан. Распределение компонентов такое же, как на бумаге. Обнаружение проводилось различными реагентами. Среди них реагент Бима — 5%-ный раствор едкого кали в абсолютном спирте — дает пурпурное окрашивание только при наличии каннабиноидов, у которых оба фенольных гидроксила свободны, то есть у КБД, КБДК, КБГ. Так как эти вещества всегда присутствуют в конопле, реагент считается специфическим для качественного определения гашиша. При опрыскивании раствором так называемой «голубой соли» (хлорид ди-о-анизидинтетразолия в 0,1 н. NaOH) каннабиноиды образуют различно окрашенные пятна.
Таким путем авторам удалось доказать, что как индийская, так и обыкновенная (европейская, посевная) конопля содержат одинаковые фенольные компоненты.
В 1971 г голландский химик Меркус [32] опубликовал критический обзор способов разделения компонентов конопли методом ТСХ. Автор рекомендует проводить анализ по следующей прописи:
100 мг гашиша встряхивают в пробирке с 8 мл петролейного эфира. Экстракт фильтруют и дважды повторяют извлечение. Объединенные фильтраты выпаривают, остаток растворяют в нескольких каплях хлороформа и наносят на пластинки с силикагелем. Обнаруживают вещества раствором «голубой соли».
Этот метод позволяет четко определить КБД, KБH и ТГК. Кроме того, он пригоден для разделения метаболитов каннабиноидов, найденных в моче человека после приема гашиша (см. стр. 46).
Преимущество метода тонкослойной хроматографии — в быстроте анализа (20—30 мин.). Недостатком всех качественных методов является то, что удается зафиксировать наличие только главных по содержанию каннабиноидов; изомеры и минорные вещества при этом не выявляются. Вместе с тем весьма важно было бы знать не суммарное содержание изомеров ТГК, а каждого в отдельности.

4.2 Количественные и полуколичественные методы
Метод ТСХ был модернизирован для полуколичественных определений важнейших каннабиноидов. Азокрасители с цветных пятен, полученные после опрыскивания диазотированным амином, элюировались спиртом, и интенсивность окраски оценивалась спектрофотометрически в видимой области. Предварительно строились калибровочные кривые для каждого индивидуального компонента. Этим методом были проанализированы экстракты конопли и гашиша из разных стран мира; показано, что количественные соотношения фенольных веществ варьируют в широких пределах. Несмотря на сравнительную простоту метода, точность оказывается не столь высокой.
Клауссеи, Боргер и Кортэ [33] использовали для анализа экстрактов конопли газовую хроматографию (ГЖХ). Фрактограмма одной пробы гашиша испанского происхождения показала наличие по меньшей мере одиннадцати индивидуальных веществ, в том числе трех изомеров ТГК. Хотя не все вещества точно идентифицированы, по размерам пиков (времени удерживания) можно было судить о количественном соотношении компонентов. Здесь следует принять во внимание вероятность декарбоксилирования фенолокислот при высокотемпературном режиме газовой хроматографии. Тем не менее данные газовой хроматографии являются наилучшей и наиболее полной характеристикой анализируемых образцов.
Этим методом в сочетании с тонкослойной хроматографией были проанализированы многочисленные образцы гашиша и конопли, решены многие практически важные вопросы. Выявлена определенная зависимость состава каннабиноидов от климатических условии произрастания конопли. В растениях северных районов земного шара гашиш менее активен (отличается пониженным содержанием изомеров ТГК) по сравнению с южными.
С помощью ТСХ авторам удалось установить режим реакции, при которой происходит циклизация КБД в различные изомеры ТГК. Показано, например, что при нагревании до 300° КБД образует не только всю гамму изомеров ТГК, но частично дегидрируется в КБН и распадается на оливетол. Изучено влияние ультрафиолетового света и кислорода на ход этой реакции.
Авторы проследили за изменением соотношения между каннабиноидами в листьях и соцветиях конопли в процессе вегетации растения. При этом было обнаружено преобладание КБДК в начальной стадии развития растения и увеличение менее полярных каннабиноидов в последней стадии вегетации. Высказано даже предположение о роли КБДК как материнского вещества, которое по мере роста растения, а также ферментативных процессов при хранении постепенно превращается в КБД и ТГК. Этим они объясняют и различие в физиологической активности обыкновенной (более богатой КБДК) и индийской конопли (содержащей больше ТГК).
Японским химик Авамаки с сотрудниками [34] нашли, что при ТСХ на силикагеле в системе бензол, н-гексан и диэтиламин (25:10:1) четко разделяются КБН, ТГК и КБД (Rf соответственно 0,25: 0,35; 0,45).
Для опрыскивания хроматограмм были испытаны различные реагенты. Лучшими признаны диазотнрованный бензидин и «голубая соль», которые дают окраску пятен, позволяющую различать важнейшие каннабиноиды.
Авторы приводят таблицу окрасок:
Вещество
Диазотированный бензидин
«Голубая соль»
КБД
Желто-оранжевая
Желто-розовая
ТГК
Красно-оранжевая
Фиолетово-розовая
КБН
Красно-коричневая
Фиолетово-красная

ТСХ в приведенных условиях рекомендуется для судебно- и химических исследований.
В той же системе растворителей проводилось и препаративное разделение на колонке с силикагелем. Полученные фракции группировались по данным тонкослойной хроматографии; константы полученных веществ соответствовали литературным данным.
Своеобразна методика подготовки образцов для анилина: предварительно высушенные и измельченные в порошок растения (навеска точно 1 г) выдерживались в закрытых сосудах в 10 мл спирта в течение 2 дней. Экстракты выпаривались досуха, снова растворялись в небольшом количестве спирта и отделялись от выпавшего воска фильтрованием. Фильтрат разбавлялся точно до 10 мл спиртом. В I мл такого раствора содержится сумма каннабиноидов из 0,1 г растения. Стандартные растворы индивидуальных каннабиноидов готовились так, чтобы 0,1 мкг вещества содержалась в 1 мкл растворителя.
Приготовленные растворы использовались для ГЖХ. Хроматограф Shimadzu model GC-1B с пламенным водородным ионизационным детектором. Колонка из нержавеющей стали U-образная, 2,25 м 4 мм, содержала 1,5% SE-30 на Chromosorb W (60-80 меш), обработанного гексаметилдисиланом. Температура колонки 220°, испарителя - 2900. Скорость потока азота 35 мл/мин. Относительное время удерживания КВД, ТГК и КБН соответственно 4,92; 6,58; 8,17 хорошо согласуется с данными для чистых веществ, хотя на фрактограмме были и другие мелкие пики. В качестве стандарта был использован хлористоводородный кокаин.
В таблице приведены данные анализа гашиша 6 различных образцов в процентах от веса сухого исходного материала.
Компонент
Образцы
Япония
США
Индии
I
II
Ш
IV
V
VI
КБД
1.05
0,41
0,20

стр. 1
(общее количество: 2)

ОГЛАВЛЕНИЕ

След. стр. >>